Introdução: O efeito antibacteriano do cimento de ionômero de vidro (CIV) é limitado, e a quantidade de flúor liberada não é suficientemente forte para inibir o crescimento bacteriano. Objetivo: Avaliar, de forma inédita, o efeito da incorporação de vanadato de prata nanoestruturado (AgVO₃) nas propriedades biológicas do CIV. Método: Quarenta blocos de esmalte bovino foram preparados e restaurados com CIV (controle), CIV + 1% AgVO₃, CIV + 2,5% AgVO₃ e CIV + 5% AgVO₃. Essas amostras foram expostas ao biofilme de Streptococcus mutans a 37 °C por 5 dias. A desmineralização do esmalte foi avaliada pela análise de microdureza Knoop com carga de 50g por 15 segundos. Para avaliar a formação de biofilme, viabilidade celular e liberação de citocinas, amostras de CIV (Ø 6 mm × 3 mm) foram obtidas com e sem o nanomaterial. A formação do biofilme foi analisada por microscopia de fluorescência. A viabilidade da linhagem celular VERO foi avaliada por meio do ensaio com resazurina. Células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) foram cultivadas sobre as amostras por 24 horas, e em seguida o sobrenadante foi coletado para determinação de IL-6, TNF-α, IFN-γ e IL-10 por ELISA. Os dados foram analisados por ANOVA seguida do pós-teste de Tukey (α=0,05). Resultado: A menor perda percentual de microdureza (p<0,05) e a menor formação de biofilme foram observadas no grupo CIV + 1% AgVO₃. As formulações de CIV com AgVO₃ não reduziram a viabilidade das células VERO (p>0,05), exceto o grupo com 5% (p=0,040). A liberação de IL-6, TNF-α, IFN-γ e IL-10 por PBMCs expostas ao CIV modificado com AgVO₃ não foi diferente do grupo controle celular (p>0,05). Conclusão: Os resultados sugerem que as formulações de CIV com AgVO₃ são biocompatíveis com células VERO, não induzem resposta inflamatória mediada por citocinas e promovem redução da desmineralização do esmalte e da formação de biofilme na concentração de 1%.