Introdução: A busca por substitutos ao hipoclorito de sódio (NaOCl) tem se intensificado, especialmente em terapias endodônticas regenerativas para dentes com necrose pulpar e rizogênese incompleta. O hipoclorito de cálcio [Ca(OCl)₂] se destaca por apresentar ação antimicrobiana semelhante à do NaOCl, porém com menor toxicidade. Dada a importância das células da papila apical humana (hAPCs) nesses tratamentos, é essencial compreender como diferentes irrigantes as afetam. Objetivo: Investigar os efeitos do Ca(OCl)₂ sobre a viabilidade, proliferação e quimiotaxia de hAPCs, em comparação com o NaOCl e o EDTA. Método: Com aprovação ética (CAAE 48300321.0.0000.5416), hAPCs foram isoladas de terceiros molares imaturos de três doadores, por digestão enzimática. Após confirmação de marcadores de células-tronco, as células foram expostas ao Ca(OCl)₂ 1,5%, NaOCl 1,5%, EDTA 17% ou meio controle. A viabilidade foi analisada por MTT, a proliferação por incorporação de BrdU e a migração celular por ensaio transwell. Os resultados foram tratados por ANOVA duas vias e Tukey ou Kruskal-Wallis/Dunn (α=0,05). Resultado: O Ca(OCl)₂ demonstrou menor citotoxicidade do que NaOCl e EDTA (p<0,05), que não diferiram entre si (p>0,05). A proliferação celular reduziu-se com o aumento da dose em todos os grupos (p<0,05), mas o Ca(OCl)₂ induziu maior proliferação na dose mais alta (p<0,05). A migração celular com Ca(OCl)₂ foi semelhante ao controle (p>0,05), embora inferior à observada com NaOCl e EDTA (p<0,05). Conclusão: O Ca(OCl)₂ a 1,5% se mostrou menos tóxico, promoveu maior proliferação celular e não inibiu a migração das hAPCs, sugerindo ser uma alternativa promissora como irrigante em terapias regenerativas.