Introdução: A efetividade clínica dos dentifrícios fluoretados está relacionada à retenção de flúor (F) na cavidade bucal. Estudos têm avaliado o impacto do uso de diferentes quantidades de dentifrício, comparando formulações convencionais (~1100 ppm F) e de baixa concentração (~550 ppm F), em biofilmes de interesse cariogênico. Contudo, essas variáveis ainda não foram exploradas em biofilmes complexos. Objetivo: Avaliar, in vitro, o efeito de dentifrícios contendo 0, 550 ou 1100 ppm F, aplicados em diferentes quantidades, nas concentrações de F, cálcio (Ca) e pH de biofilmes microcosmos derivados de saliva, formados pelo Modelo de Adesão Ativa de Amsterdam (AAA). Método: Após aprovação ética (CAAE 66163422.8.0000.5420), a saliva de cinco voluntários saudáveis foi usada para formação dos biofilmes (modelo AAA). Foram testadas combinações de 550F ou 1100F em três intensidades: (i-1) 0,08 g e 0,04 g; (i-2) 0,16 g e 0,08 g; (i-3) 0,32 g e 0,16 g, respectivamente. Dentifrício sem F (PLA) foi usado como controle. F e Ca foram analisados por eletrodo íon-seletivo e método colorimétrico, e o pH, por eletrodo específico. Os dados foram analisados por ANOVA e Student-Newman-Keuls (p < 0,05). Resultado: O pH não foi alterado significativamente, exceto em 1100F/i-3. Os níveis de F foram maiores com 1100F/i-3. Todos os grupos com F apresentaram maior concentração de Ca do que o PLA, especialmente em i-2 e i-3. Conclusão: A intensidade do tratamento (concentração × quantidade) influenciou mais significativamente a resposta do biofilme do que os fatores isoladamente.