Introdução: O hipoclorito de sódio, solução com excelente capacidade de desinfecção, é amplamente utilizado e, com isso, buscas por maneiras de melhorar seu potencial antimicrobiano são recorrentes. Nesse contexto, a associação do dióxido de carbono (CO2) ao hipoclorito de sódio visa potencializar a ação dessa solução. Objetivos: Assim, o objetivo deste estudo in vitro foi avaliar o dano oxidativo causado em células de Enterococcus faecalis pela associação de CO2 pressurizado ao hipoclorito de sódio 2,5%. Metodologia: Inóculos de E. faecalis foram incubados a 37ºC por 24 horas e ajustados a densidade celular de 3x108 UFC/ml, inseridos em tubos Falcons de 50 ml e centrifugados para a formação de pellet, o qual foi fracionado em 60 microtubos Eppendorf, divididos em 6 grupos, cada grupo com n=10: HG3 (hipoclorito pressurizado 30 seg), HG1 (hipoclorito pressurizado 1 min), H1 (hipoclorito 1 min), H3 (hipoclorito 30 seg), SG (soro pressurizado) e S (soro). Os microtubos com os inóculos referentes aos grupos hipoclorito com e sem adição de CO2 foram preenchidos com 400μl com as soluções HG3; H3; HG1 e H1. Em seguida as soluções foram neutralizadas utilizandose tiossulfato de sódio 5%, removidas preenchendo com soro até completar o volume de 1000uL, centrifugadas para então remover o sobrenadante. Os homogenatos foram analisados quanto ao dano oxidativo lipídico pelo método TBARs, proteína carbonilada (PC) e proteína total (PT). Os dados foram submetidos à ANOVA (p< 0,05). Resultados: O grupo H1 apresentou melhores resultados quanto ao dano aos lipídios, maior dano as proteínas e diminuição da proteína total (P< 0,05). Conclusão: Conclui-se que a associação do CO2 com o Hipoclorito de sódio originou um produto com uma performance inferior em comparação ao hipoclorito sem gás e ao soro. Por isso, é indispensável avaliar cuidadosamente os efeitos de aditivos como o CO2 nas propriedades do hipoclorito.