Introdução: Produtos naturais têm sido utilizados como fonte de agentes terapêuticos inovadores. Objetivo: Avaliar a atividade antimicrobiana de um enxaguatório bucal sem álcool a base de óleo essencial de Croton doctoris contra biofilmes polimicrobianos. Materiais e métodos: O óleo essencial foi obtido por hidrodestilação das folhas e caracterizado por CG-MS. A saliva de um voluntário foi coletada para obtenção do inóculo polimicrobiano. As concentrações inibitória mínima (CIM) e bactericida mínima (CBM) do óleo essencial foram determinadas. Foi utilizado um modelo de indução de cárie in vitro. Os biofilmes cresceram durante 4 dias na superfície de esmalte bovino e foram tratados 2 vezes/dia por 1 min com: a) enxaguatório experimental contendo o óleo essencial na CIM (OE), b) enxaguatório controle (EC) e c) enxaguatório comercial a base de digluconato de clorexidina 0,12% (CHX). Os biofilmes foram analisados quanto a sua composição microbiológica e acidogenicidade. O esmalte foi analisado quanto a perda de dureza de superfície (%SH). A citotoxicidade do óleo essencial foi avaliada utilizando cultura de fibroblastos. Resultados: O óleo essencial é composto majoritariamente por sesquiterpenos (66,11%). A  CIM / CBM do óleo essencial foram 0,63 / 1,25%. Em comparação a EC, o tratamento com OE e com CHX reduziu significativamente a %SH e a viabilidade bacteriana no biofilme. A citotoxicidade do óleo essencial foi semelhante à da CHX. Conclusão: O enxaguatório bucal contendo óleo essencial de C. doctoris possui atividade antimicrobiana promissora contra biofilmes polimicrobianos e citotoxicidade semelhante ao produto comercial.