A higiene das mãos é parte das precauções padrão e tem sido enfatizado que a educação dessa prática depende da experiência individual em higiene geral. Um Inventário em Higiene (HI-23) foi proposto (Stevenson et al., 2009) e avalia os domínios Higiene Geral, das Mãos, Pessoal, Doméstica e na Alimentação. O Objetivo desse estudo foi realizar a adaptação transcultural do HI-23 para o português-Brasil e verificar a confiabilidade e consistência interna do instrumento adaptado. Após a tradução e retrotradução do instrumento de pesquisa, realizou-se o estudo com 40 voluntários acadêmicos da FOAr-UNESP, em 2 momentos distintos. Avaliou-se a reprodutibilidade intra‑examinador e a consistência interna do instrumento traduzido. Os resultados indicaram boa reprodutibilidade (0,43 ≥ κ ≥ 0,81) e boa consistência interna (α- Cronbach = 0,74). Concluiu-se que o questionário HI-23 traduzido para o português-Brasil mostrou-se um instrumento confiável para medir o perfil em higiene. Esse estudo permitirá realizar novas pesquisas sobre o comportamento em higiene das mãos e os fatores motivadores ou que interferem com a prática, contribuindo para o aprimoramento das estratégias de ensino em Biossegurança.