Para eliminar a microbiota remanescente em procedimentos de remoção parcial de cárie, como o tratamento restaurador atraumático - TRA, estão sendo incorporados antimicrobianos, como a clorexidina, aos cimentos de ionômero de vidro (CIV). Os objetivos desse estudo foram avaliar in vitro a ação inibitória de cimentos de ionômero de vidro convencionais (CIV) associados ou não a clorexidina (CX) sobre Streptococcus mutans, Candida albicans e Lactobacillus acidophilus, utilizando o teste de difusão em ágar. Poços com 4mm de diâmetro (n = 10) foram confeccionados sobre BHI ágar contendo 300 µ L do inóculo microbiano e os cimentos Ketac Molar (KM), Vidrion R (VR) e Vitromolar (VM) - com ou sem CX - foram inseridos até o seu completo preenchimento. As placas foram incubadas por 48h e os halos de inibição mensurados. Para análise estatística foram utilizados os testes de Kruskal-Wallis e de comparação múltipla. Os resultados mostraram que os três CIVs não apresentaram atividade contra os microrganismos testados. Entretanto, quando incorporada CX 1.25%, em todos os CIV foram verificados halos de inibição contra S. mutans e L. acidophilus, sendo observada a seguinte ordem de atividade antibacteriana: KM > VR> VM. Somente KM teve ação contra C. albicans quando associado a 2.5% de CX. Conclui-se que a associação de CX ao CIV foi efetiva in vitro contra os microrganismos cariogênicos testados.