Gelatinases são endopeptidades zinco-dependentes que formam uma das classes das metaloproteinases da matriz (MMPs). O objetivo deste estudo foi localizar, em dentina saudável de molares de ratos, onde há atividade de gelatinases por meio da técnica de zimografia in situ. Para tanto, 10 ratos Wistar com 12 semanas de idade foram sacrificados, suas hemimandíbulas foram removidas, fixadas em paraformaldeído, lavadas em PBS+glicerol e descalcificadas em EDTA+glicerol. Em seguida as peças foram lavadas em PBS+glicerol+sucrose e incluídas em Paraplast. Cortes longitudinais da região de molares foram incubados com Dq Gelatin (Invitrogen) diluído em tampão Tris/HCl/CaCl 2 . Como controles, cortes foram incubados com Dq Gelatin + inibidor de MMPs ou apenas com tampão Tris/HCl/CaCl 2 . Após a incubação foi possível observar, por meio de microscopia de fluorescência confocal, atividade gelatinolítica em praticamente toda a dentina. Próximo ao limite amelo-dentinário, na pré-dentina, e na dentina peritubular observou-se maior atividade gelatinolítica em relação a toda dentina analisada. Pode-se concluir que é possível detectar a atividade de gelatinases em dentina de molares de ratos por meio da técnica de zimografia in situ, e que tal atividade varia em diferentes regiões da dentina.