O cimento Portland (CP) apresenta excelente propriedade biológica. O objetivo deste estudo foi avaliar a biocompatibilidade do CP associado a diferentes agentes radiopacificadores em cultura primária de células do folículo dental (hDFCs). Após remoção do tecido do folículo dental de molares, as hDFCs foram isoladas e cultivadas em meio RPMI. Para o teste de viabilidade celular (MTT) elas foram semeadas em placas de cultura de 24 poços (10 4 cells.well –1 ) e expostas por 1, 2, 3 e 7 dias aos materiais colocados em transwells (n = 3/ grupo): CP puro, CP/óxido de bismuto, CP/tungstato de cálcio, CP/óxido de zircônio e Sealer 26 como controle negativo. Os dados foram analisados estatisticamente (ANOVA, Bonferroni, p < 0,05). Para a análise morfológica em MEV, as hDFCs foram diretamente semeadas sobre as amostras de cimentos e cultivadas por uma semana. Os resultados de MTT demonstraram uma taxa significativa da viabilidade celular após os períodos de exposição aos grupos de CP/radiopacificadores. As imagens de MEV demonstraram morfologia normal e células aderidas à superfície das diferentes associações. Conclui-se que as diversas associações de agentes radiopacificadores são biocompatíveis e que cultura primária de células do folículo dental (hDFCs) são viáveis para avaliação da biocompatibilidade de materiais endodônticos