O objetivo deste estudo foi analisar a efetividade microbiológica da incorporação de três soluções desinfetantes (hipoclorito de sódio a 1%, glutaraldeído a 2% e digluconato de clorexidina a 2%) em três diferentes porcentagens de substituição da água da espatulação (25%, 50% e 100%) de um gesso tipo IV. O teste microbiológico utilizado foi o de difusão em ágar para: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis e Candida albicans. Os corpos de prova foram confeccionados com gesso tipo IV, vazado em moldes de silicone (5mm de diâmetro e 3mm de espessura). Cada grupo foi composto por amostras divididas em: a) controle (água destilada); b) 25%, 50% e 100% e substituição de água por glutaraldeído; c) substituição da água de espatulação em 25%, 50% e 100% por hipoclorito de sódio; d) 25%, 50% e 100% da substituição de água por digluconato de clorexidina. Após preparo de rotina das suspensões microbianas e inoculação dos microorganismos em placas de Petri com meios de cultura específicos, quatro corpos de prova foram posicionados e armazenados em estufa. Após 24 horas as zonas de inibição do crescimento microbiano eram mensuradas. Os resultados foram submetidos a análise de variância de Tukey, permitindo concluir que a solução de digluconato de clorexidina apresentou os melhores resultados de inibição do crescimento microbiológico.